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產品編號 :
112316295716
產品名稱 :
人表皮生長因子受體2(Her2/neu)檢測試劑盒
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   產 品 說 明
 

人表皮生長因子受體2(Her2/neu)檢測試劑盒

(酶聯免疫吸附法)說明書

【產品名稱】

       通用名稱 :人表皮生長因子受體2(Her2/neu)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附法)           

【包裝規格】

       48測試/盒 、96測試/盒 。

【預期用途】

       本產品用於體外定量檢測人血清樣本中的表皮生長因子受體2(Her2/neu) 。

Her2/neu是致癌基因(erbB-2)編碼的一種蛋白 ,分子量為185,000道爾頓(簡稱p185) ,該致癌基因家族編碼的細胞表麵受體含有細胞間酪氨酸激酶活性 ,結構上與表皮生長因子受體(erbB-1)相似 ,是人表皮生長因子受體家族成員之一1-3 。自從20世紀80年代中期Her2/neu致癌基因及其編碼蛋白被報道以來 ,其在部分乳癌的發展和轉移中發揮重要作用4-6 。檢測Her2/neu可用於監測血液中Her2水平高於15 ng/mL的乳腺癌轉移患者 ,檢測結果應與該患者臨床其它診斷程序和信息 ,如病理學檢測等 ,結合使用進行乳腺癌管理 。

【檢測原理】

    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定法 。包被液中含有一株抗Her2胞外區(ECD)的單克隆抗體 ,包被微孔板製成固相抗體 ,當加入的待測血清樣品中含有Her2Her2校準品時 ,可與微孔板中吸附的抗Her2抗體結合 ,再加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的另一抗Her2單克隆抗體時 ,即可與微孔板中第一抗體捕獲的Her2結合 ,經充分洗滌後 ,加入酶聯免疫反應TMB底物 ,產生的顏色反應與血清樣品中存在的Her2Her2校準品的含量在一定範圍內呈正比 。當顏色反應一定時間後 ,加入酸性終止液以終止顏色反應 。在酶標檢測儀上 ,測定450 nm(參考波長630 nm)的光吸收值 ,就可獲得校準曲線和待測人血清樣品中Her2的濃度 。

 

1. 雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定法測定原理

【主要組成成份】

規格

組成                               

96測試/

48測試/

成份

1.    包被酶標板

1塊(96孔)

1塊(48孔)

 Her2鼠源單克隆抗體包被的酶標板 。

2.  酶標抗體

1管 ,0.2 mL

1管 ,0.1 mL

酶標抗Her2鼠源單克隆抗體 、胎牛血清 、磷酸緩衝液 。

3.        校準品

7管 ,0.8 mL/

濃度(ng/mL)分別為 :20  、 10 、 5 、 2.5  、 1.25 、 0.63 、 0.16 。

7管 ,0.3 mL/

濃度(ng/mL)分別為 :20 、10 、5 、2.5  、 1.25 、 0.63 、 0.16 。

 重組人Her2胞外區蛋白 、胎牛血清 、磷酸緩衝液 。

 

4.        質控品

1管 ,1 mL

1管 ,0.5 mL

能分泌Her2胞外區蛋白的細胞培養上清

每批質控品靶值範圍另附 。

5.        空白對照

1管,0.8 mL

1管 ,0.2mL

磷酸緩衝液 、吐溫-20 、牛血清白蛋白 。

6.        20×洗滌液

1瓶 ,50 mL

1瓶 ,25 mL

磷酸緩衝液 、 吐溫-20 。

7.        稀釋液

1瓶 ,25 mL

1瓶 ,13 mL

磷酸緩衝液 、吐溫-20 、牛血清白蛋白 。

8.        顯色液

1瓶 ,12 mL

1瓶 ,7 mL

四甲基聯苯胺(TMB)底物液 。

9.        終止液

1瓶 ,12 mL

1瓶 ,7 mL

 1 M  HCl 。

10.     封板膜

3

1

 

11.     樣品稀釋板

1

1

 

注 :不同批次試劑盒成份不能混用 。所提供試劑不可以其他來源試劑替代 。

校準品溯源性 :

人表皮生長因子受體2Her2/neu)的定量檢測無國際約定參考測量程序和國際約定校準品,不能在計量上溯源到SI 。因此本試劑盒以西門子Her2定量測定試劑盒(化學發光法)作為製造商選定測量程序 ,檢測一批校準品 ,同時與理論值相比較 。已被賦值的校準品將作為企業參考品 ,用於標定其他批次的校準品 ,或可直接用作產品校準品 。

需自備材料 :

去離子水/純淨蒸餾水(符合實驗室純淨水標準) ;微量加樣器 ;移液器和移液管 ;振蕩器/搖床 ;酶標儀 ;離心機 。

【儲存條件及有效期】

2-8 ℃保存 ,有效期12個月 。

開封/瓶後 ,酶標板放入鋁箔袋中封口幹燥保存 ,其它試劑要及時放回2-8 ℃保存 ,有效期1個月 。

【適用儀器】

酶聯免疫測定儀(儀器測定值範圍應在OD :0.001-3.000之間) ,測定波長450nm ,參比波長630nm 。

【樣品要求】

       樣品收集 、處理和保存 :

血清 :按照國家臨床實驗室標準協會建議采用下列措施處理和儲存血液樣品 :使用靜脈穿刺術通用預防措施收集血液 ;1500 rpm離心10 min ,離心前使血清樣品充分凝結 ;保持樣品加蓋封閉並始終豎直向上 ,禁止使用室溫下保存長於8小時的樣品 ;若測試不能在8小時之內完成 ,緊密封閉 ,置於2-8 ℃ ;若樣品未在24小時之內完成測試 ,在-20 ℃或以下保存 。冷凍的樣品使用前應解凍 ,完全混合並離心以保證結果的一致性 。避免反複凍融 。

【檢驗方法】

1試劑準備

1)洗滌液() :以去離子水或蒸餾水將20×洗滌液稀釋20倍 ,輕混以防起泡 ,混勻後使用 。稀釋後的洗滌液pH7.2-7.4 ,保存於2-8 ℃ ,7天內使用 。

2)酶標抗體 :用稀釋液作50倍稀釋 ,現用現配(1小時內使用) 。

       2.檢驗方法

(1)樣品稀釋 :待檢樣品(血清)先用稀釋液作20倍稀釋(5 μL樣品+95 μL 稀釋液) ,如果有樣品檢測超過線性上限 ,可繼續做20倍以上稀釋 。

(2)確定所需孔數 :空白對照 、校準品 、樣品 、質控品 。移除多餘孔條密封保存於2-8 ℃ 。

3)在酶標板孔中分別加入(請做好加樣的順序標記和記錄) :

       校準品孔 :從7個校準品管裏 ,各取100 μL ,按照濃度由低至高的順序將校準品加入酶標板中 ,每個濃度要更換新的吸頭 。

       樣品孔 :加入稀釋後的樣品100 μL 。

       空白對照孔 :加入空白對照100 μL 。

質控品孔(客戶選定位置) :加入質控品100 μL 。

4)在上述(3)的各孔中每孔加入已稀釋的酶標抗體50 μL(以稀釋液稀釋50倍) 。

5)孵育 :用封板膜覆蓋酶標板 ,震蕩20-30 s,混勻其中液體 ,室溫(20-26 ℃)孵育2 h37孵育1.5 h 。有條件時可在轉速為100 rpm的水平搖床上進行 。

6)洗滌 :除去孔內液體 ,用洗滌液洗板3次 ,每次3-5 min ,300 μL/孔 ,最後在幹淨的吸水紙上拍幹 。

7)顯色 :加入顯色液 ,100 μL/孔 。室溫(20-26 ℃)避光 ,20 min37避光 ,20 min 。

8)終止 :加入終止液 ,100 μL/孔(加入終止液的時間點可參考最高濃度標準品 ,當其呈現深藍色時即可終止) 。

9)讀數 :立即用酶聯免疫測定儀在波長450 nm條件下測定各孔的OD值(或在4 ℃保存1 h內測定 ,以630 nm作為參考波長) 。

10)計算 :將校準品吸光度OD值作為橫坐標(X) ,相應的校準品濃度作為縱坐標(Y) ,得到相應的校準曲線y=ax3+bx2+cx+d(不通過零點) 。將樣品OD值(X)由校準曲線換算出相應的濃度(Y) ,再乘以樣品的稀釋倍數 ,即可得到所測樣品的Her2濃度 。

11)質控品 :建議每次測試進行質控 。如果質控結果與預期不符 ,提示檢測結果不可靠 ,不應出具檢測報告 。應進行分析和查找原因 ,實施改進並保留記錄 。

【參考值(參考範圍)】

0-15 ng/mL 。超過15 ng/mLHer2陽性 。

由於地理 、人種 、性別及年齡等差異 ,建議各實驗室建立自己的參考值 ,用於對患者結果進行診斷評估 。

檢驗結果的解釋

如樣品中的Her2含量低於臨界值(15.0 ng/mL) ,則表明Her2濃度在正常範圍 ;本試劑盒用於檢測乳癌期患者的Her2濃度 ,對於Her2濃度大於15.0 ng/mL的患者應進行多次檢測 ,進行趨勢分析 ,如果變化值大於或等於15%的增長認為是疾病有加重進展的趨勢 ,增長小於15%則顯示疾病無進展趨勢 。本試劑盒的測定結果僅是患者總體臨床評估的一部分 ,還要結合臨床其它診斷程序和信息進行乳腺癌管理 。

如果樣品Her2的含量不在本試劑盒校準品的線性範圍內 ,則根據此標準曲線無法得到精確的結果 。本試劑盒在0.16-20 ng/mL區間內未見倒鉤效應 。因臨床樣品需要稀釋520倍後檢測 ,所以臨床樣品的檢測範圍為0.78-100 ng/mL3.3-400 ng/mL之間 ,對於濃度大於和等於100400 ng/mL的樣品 ,應對樣品做進一步稀釋後再測定 。產品質控應在靶值範圍內 。

檢驗方法的局限性】

Her2/neu蛋白由細胞質區 、跨膜區和細胞外區(ECD)組成 。有報道ECD在正常個體的血清中存在 ,在部分乳癌轉移婦女的血清中濃度升高9-11 。而且另有報道Her2/neu蛋白在很多起源於上皮的其它類型腫瘤如肺 、胰腺、結腸 、胃 、卵巢 、子宮頸和膀胱等癌症也有過度表達12-18 。

Her2濃度不能作為惡性腫瘤早期診斷或確診依據 。治療前 ,已確診乳腺癌的患者Her2濃度也常常在正常的濃度範圍之內 。此外 ,Her2濃度升高也會在非惡性疾病和非乳癌惡性疾病的患者中發現 。

脂血(甘油三酯<20.0 mg/mL) 、溶血(血紅蛋白<25.0 mg/mL) 、黃疸(膽紅素<1.0 mg/mL)樣品對Her2檢測的影響不大 。但仍不建議臨床使用嚴重溶血 、脂血 、黃疸樣品進行檢測以最大限度減少它們對檢測結果的影響 。

產品性能指標

1. 線性

0.16-20 ng/mL濃度範圍內 ,試劑盒的線性相關係數r≥0.9900 ,且無倒鉤現象 。

2.準確性

用已知濃度的待測物加入到血清基質中(1 :9) ,其回收率R80%-120% 。

3. 最低檢測限

重複檢測20零濃度校準品 ,求OD值的M平均值+2SD(標準差) ,代入校準曲線方程計算得到的含量不大於0.10 ng/mL 。

4. 重複性

血清樣品稀釋為兩個濃度水平 ,各重複檢測10孔 ,CV不大於15.0% 。

5. 批間差

三批次試劑盒檢測同一份血清樣品 ,CV不大於15.0% 。

6. 特異性

以本試劑盒重複測定下列物質 :人血清白蛋白60 mg/mL , IL-2 10 µg/mL ,FGF 10 µg/mL ,GM-CSF 10 µg/mL ,IL-6 10 µg/ml ,胸腺肽 10 µg/mL ,EGFR 10 µg/mL ,CA125200 U /mL ,CA153200 U /mL ,CEA10µg/mL ,其交叉反應率不大於0.1% 。

【注意事項】

1 本試劑盒隻限於體外檢測 ,不得用於其它用途 。

2 操作前應仔細閱讀使用說明書 ,按照說明書的操作程序進行 。

3 嚴格按照臨床血液樣品檢驗操作規程進行 。

4 使用前試劑盒應置於室溫平衡片刻 ,管內試劑建議離心後使用 。

5 顯色液須避光保存 。加入終止液後立即讀取OD值 。

6 已開封的試劑盒應盡快使用 ,使用所剩試劑 ,按要求保存 ,防止汙染 。

7 安全性 :本試劑盒中所采用的試劑都不具有毒性 、致畸 、致突變性 ,也不含有人血液製品 ,因此不具有生物學危害 ,但仍需作為一般生物試劑加以防護 ,樣品 、洗棄液和各種廢棄物都應當按傳染物處理 。

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【生產企業】                                                         

企業名稱 :北京yoplay遊戲興生物技術有限公司

生產地址 :北京市平穀區山東莊鎮西瀝津西路2

注冊地址 :北京市平穀區山東莊鎮西瀝津西路2

郵政編碼 :101211

電話 :010-60938034

傳真 :010-60938034

【醫療器械注冊證書編號】 :國械注準字20163400152

【醫療器械生產許可證編號】京藥監械生產許20120064

【產品標準編號】

 

 

 

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